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氨基酸的柱前衍生技术

来源 : www.biosensor1.org   发布时间 : 2014-11-27

自上世纪80年代以来,应用高效液相色谱法测定氨基酸的研究发展迅速,特别是对柱前衍生-反相高效液相色谱法(RP-HPLC)的研究取得了显著进展。相对于其它方法,RP-HPLC分析方法更加灵敏(可测知<1pmol水平)和快速(完成一种蛋白质的水解、分离和测定只需12~30min),衍生反应也较便捷,易与仪器结合实现商品化。

RP-HPLC要求将氨基酸在柱前转化为适于反相色谱分离并能被灵敏检测的衍生物,其关键在于衍化生试剂的选择。选择衍生化试剂的标准包括:
  该试剂能与各氨基酸进行定量反应;每种氨基酸只生成一种化合物;目标产物有一定的稳定性,不产生或易于排除干扰物;便于实现自动化;产物能在不同型号的高效液相色谱仪上进行测定。目前国内应用较为广泛的柱前衍生化试剂列于表1,常用的柱前衍生试剂有邻苯二甲醛(OPA)、异硫氰酸苯酯(PITC)、氯甲酸芴甲酯(FMOC-Cl)、丹磺酰氯(Dansyl-Cl)及二硝基氟苯(FDNB)等。

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