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高效阴离子交换色谱积分脉冲安培检测法

来源 : www.biosensor1.org   发布时间 : 2014-11-27
  高效阴离子交换色谱积分脉冲安培检测法氨基酸分子中的羧基在强碱性介质中可形成阴离子,而氨基酸分子中的氨基在强碱性介质中和一定的电位下可在贵金属(金、铂)电极表面发生氧化反应,基于上述原理可实现对氨基酸的阴离子交换色谱分离和积分脉冲安培检测。该方法的优点是不需要对氨基酸进行衍生化处理,可直接进行分离和检测,且检出限较低。蔡亚歧等将高效阴离子交换色谱-积分脉冲安培检测法应用于鱼粉和玉米粉水解液中氨基酸组分的分析测定,使用DionexAminoPacPA10阴离子交换柱为分析柱,控制柱温为35℃,以NaOH和NaAc强碱性溶液为淋洗液,在合适的梯度条件下,实现了对17种常见氨基酸的高效分离与高灵敏检测。
  气相色谱法
  将氨基酸衍生化为易于汽化的物质后,采用气相色谱法可测定多组分混合氨基酸。该方法的优点是分离时间短、柱效高及易与质谱联用,缺点是衍生化反应容易产生干扰成分。Husek等采用气相色谱法同时分析血浆中的20种氨基酸和30种非氨基有机酸,样品制备时间少于30min。
  高效液相色谱法
  该方法包括柱前衍生和柱后衍生两大类。目前多用柱前衍生-反相高效液相色谱法,即首先将氨基酸转化为适于反相液相色谱分离并能被灵敏检测的衍生物,然后采用高效液相色谱法对上述衍生物进行分离和检测。该方法灵敏、快速、应用范围广、易于自动化。牟德海等建立了邻苯二甲醛(OPA)手动柱前衍生-反相高效液相色谱法测定样品中氨基酸含量的方法,对牛血清白蛋白(BSA)的氨基酸组成和小鼠血清中的游离氨基酸进行了测定,取得满意的结果;苗虹等采用柱前衍生-高效液相色谱法测定食物中天冬氨酸、赖氨酸、亮氨酸等16种氨基酸含量。

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