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氨基酸分析的准确度与精密度

来源 : www.biosensor1.org   发布时间 : 2014-12-09

氨基酸分析

1.准确度

氨基酸分析的准确度常以下述三种方法来衡量:(1)具有理论值、顺序仪测定值或其它文献值的纯蛋白各氨基酸的回收率;(2)添加回收率试验;(3)线性响应检验,即将两种已知氨基酸含量的样品按一定比例混合起来,然后比较测定值与预期值的吻合程度。表2汇总了国内外常用氨基酸分析准确度检验的几种方法及实际结果。由此可大致看出目前氨基酸分析准确度的一般水平。FAO/WHO蛋白质量评价专家联席会建议在比较不同方法时用氨基酸序列仪测得的理论值,即每mol纯蛋白的残基数来衡量。在实际样品分析中则用各氨基酸及NH:的N回收率来检验,一个好的方法与分析结果,其N回收率应大于90%。对已知含有较多非氮基酸N的样品,如酵母(它含有较多的核酸),其N回收率也应达80%~85%。
  2.精密度

氨基酸分析的精密度常以实验室间联合试验的室内与室间变异系数-一重复性和再现性来衡量。自1951年以来世界上共进行了蛋白水解液联合试验19次,生理体戒联合试验一次。
  不难看出,蛋白水解液分析的精密度改进为明显,目前一般氨基酸的室内相对标准偏差为3%左右,室间达6%~7%。胧、蛋氨酸变异较大,室内变异4%~6%,室间8%~10%。色氨酸变异大,室内变异可小于5%.然而室间变异一般可达8%一12%。标准氨基酸混合液的精密度已接近仪器制造商所宣称的标准,纯蛋白的精密度一般好于食品、饲料等的分析精密度。FAO/WHO蛋白质量评价专家联席会认为现代氨基酸分析数据,其重复性(室内变异系数)可允许达5%,而再现性(室间变异系数)允许达10肠,但它指示上述联合试验大都是以IEC法为主进行的,只有Miller和Allred,近的试验涉及了GLC和HPLC法,固此急需进行新方法特别是柱前衍生HPLC法的实验室间联合试验。


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